大鼠 (Rat) 白細胞介素-8（IL-8）ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 標本：血清或血漿 試驗原理：
IL-8試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知IL-8濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將IL-8和標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-8的濃度呈比例關系。
試劑盒內容及其配制
自備材料
1．蒸餾水。 2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 3．振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性 1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。 2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。 3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
大鼠 (Rat) 白細胞介素-8（IL-8）ELISA 檢測試劑盒操作注意事項 1．試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。 2．實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。 3．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。 4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。 5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。 6．洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。 7．底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。 8．加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。 9．按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法 1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。 3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4、保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備 1．標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
大鼠 (Rat) 白細胞介素-8（IL-8）ELISA 檢測試劑盒操作步驟 1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。 2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。 3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。 4．甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。 5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。 6．甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。 7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。 8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。 9．在450nm波長處測定各孔的OD值。
建議使用的實驗方案
局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結果。
試劑盒性能 1. 靈敏度：小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。 2. 特異性：不與其它細胞因子反應。 3. 重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
結 果 判 斷 與 分 析 1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值 2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的IL-8標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的IL-8含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。 3、檢測值范圍：0-800pg/ml 4、敏感度： 1.0 pg/ml
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